操作步骤

石蜡切片

1. 脱蜡：二甲0---，室温，2 次，每次 5～10min。

2. 水合 100%、100%、95%、90%、80%、70%---、蒸馏水，每级 3min。

3. 在洗涤缓冲液中润洗 10min。

4. 如有---，封闭内源性---化物酶（含 0.3% h2o2 无水甲0醇）

5. 继续通用步骤。

冰冻切片

1. 空气中干燥切片，至少 1hr

2. 用前用合适的固定液固定，如果要延长保存时间，固定后在空气中干燥 1hr。 单独包装在铝箔袋中，–70°c 干燥保存，用前从冰箱取出，室温放置至少 1hr。

3. 浸入洗涤缓冲液中 10～15min。

4. 如有---，封闭内源性---化物酶（含 0.3% h2o2 无水甲0醇）。

5. 继续通用步骤。

过度染色

1. 没有有效封闭内源性---化物酶。

2. 不完全脱蜡。

3. 过度组织粘附。

4. 一抗稀释度不当。

5. 蛋白质非特---结合。

不染色

1. 忘记加一抗、生物素化二抗或亲合素-hrp。

2. 处理过程中抗原破坏。

3. 固定不当。

4. 用含---钠洗涤液。

5. 操作过程中样品彻0底干燥。

6. 未按操作程序操作。

染色较弱

1. 加免0疫试剂前没有将洗涤液去掉。

2. 抗0体稀释不当。

3. 显色前底物放置时间过长。

4. ---0---的破坏作用。

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抗0体稀释液，即用于稀释抗0体的溶液。在抗原抗0体反应的实验中，需用已经制备的抗0体检测样本中的抗原，但抗0体试剂的浓度---，需要稀释合适的倍数后才可以用于检测抗原。

脱脂奶粉

脱脂奶粉容易发霉变质，不利于抗0体的回收和保存；国产milk脱脂不充分会增加背景、拮抗抗原抗0体结合，且不能用来做磷酸化蛋白；不能用于稀释二抗。