发布单位:苏州博特龙免疫技术有限公司 发布时间:2022-6-13
quickantibody系列免0疫佐剂有哪些特点?
与常规使用的弗氏佐剂相比,quickantibody免0疫佐剂具有免0疫周期短、针次少、无需乳化、抗原用量低、抗0体滴度高、抗0体亲合力高、易获得构象型表位的抗0体等多方面优点,详述如下:
1. quickantibody只需两针免0疫,无论是用于单克0隆还是多克0隆抗0体制备,与弗氏佐剂相比可减少免0疫针次。
2. quickantibody通过减少免0疫针次和降低每针次抗原用量,从而可---节省总抗原用量。使用的抗原用量为(1)免0疫原性较弱的亚单位蛋白抗原每针次5-50μg(通常为小鼠5-20μg,
兔子20-50μg);(2)免0疫原性较强的灭活全---或全---以及---样颗粒抗原每针次1-10μg(通常为小鼠1-5μg ,兔子5-10μg)。
由于改良免0疫法只需二次基础免0疫而常规免0疫法则需要2倍于改良法的免0疫次数,所以改良法抗原用量明显少于常规法,从而---减少了实验成本的消耗。
此外,本实验通过对比两种免0疫方法的细胞融合率及抗0体阳性率,发现改良免0疫法均---高于常规免0疫法。
经过后续实验,证明改良法免0疫小鼠的杂交瘤细胞经二次克0隆化后,抗0体阳性率可达检测孔的90%以上。杂交瘤细胞体外连续传代培养,并冻存复苏后仍具有分泌afp—mcab的能力,并经染色体计数结果表明已成功获得一株afp—mcab细胞株。这表明改良法与常规方法具有同样的有效性和稳定性。
使用方法
1. 用生理盐水将抗原稀释到2倍zui终浓度(按每针次50μl用量配制)。
备注:使用的抗原用量为
(1)免0疫原性较弱的合成肽每针次10-100μg;
(2)亚单位蛋白抗原每针次1-10μg;
(3)免0疫原性较强的灭活病原微生物和---样颗粒抗原每针次1-10μg;
(4)肿0瘤细胞裂解物每针次10-100μg。
2. 37oc水浴中解冻佐剂,充分混匀,无菌条件下取出所需用量(按每针次50μl)与抗原按体积比1:1混匀。
3. 通过后腿小腿肌肉或腹0股0沟皮下0注射免0疫小鼠,每只小鼠注射100μl。
4. 第7天按同样方式加强免0疫1针。备注:每次免0疫佐剂和抗原现配现用
5. 第014天通过elispot、胞内细胞0因子染色、mhc四聚体染色或其他可行方法检测脾0脏或---淋巴0结中的抗原特---cd4+ th1和/或cd8+ ctl反应。
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甲胎蛋白(afp)是一种胎儿特---糖蛋白,分子量约70,000~72,000道尔顿^,在胚胎肝0脏和卵黄囊中合成,正常人血中含量甚微。1972年有人首0次---开放性神0经管畸形胎儿、羊水中有高水平的afp。若胎儿羊水中afi’值高于均值常见于患无脑儿或脊柱裂的胎儿,亦见于其他多种畸形,如先天0性shen病、食道或肠闭锁、囊0性水瘤、骶尾部畸胎瘤、rh血型不和、---、先0天性性腺发育不全等∽j。1983年发现母体血0清afp水平的降低与唐氏综合征有密切关系一。。因此制备高0效特异的afp单克抗0体(mcab)具有重要的意义。