美国出版协会(aap)于1998年创建了doi以来，制定了标准，并建立了相应的解析系统，目前在出版界得到了广泛和成功的应用。doi已用于期刊、电子书、技术报告、标准等各种文献类型的标识，并向与文献相关的科学数据、版权、甚至作者标识等多元化方向发展。截止2008年4月底，doi的注册量已超过了3，000多万个，应用doi的出版社和学会有2，500多家，图书馆1，300多个。万方数据公司已获得了在注册doi代理机构权。

动物免0疫

使用 quickantibody 作为免0疫佐剂，对小鼠腿部肌肉注射免0疫，mrj 重组蛋白( 1 μg /ml) 与免0疫佐剂各200 μl 混匀免0疫 6-8 周龄 balb / c 小鼠 4 只，每只注射 100 μl。初次免0疫后第 21 天同样的方法进行第二次免0疫，第 35 天尾静脉取少量血做效价检测，间接 elisa 检测效价滴度高于 1 ∶ 8 000 则进行冲击免0疫，冲击免0疫直接以不加佐剂的 mrj 蛋白对小鼠冲击免0疫一次，每只 20 μg。冲击免0疫后 96 h 内取脾0脏细胞做细胞融合。

饲养层细胞制备

于细胞融合前---，准备饲养层细胞，常选用小鼠腹腔渗出细胞，其中主要是巨噬细胞和淋巴细胞。应用腹腔渗出细胞的好处是: 一方面做饲养细胞，另一方面巨噬细胞可以吞噬死0亡的细胞和细胞碎片，为融合细胞的生长造成---的环境。腹腔细胞的数目应适宜，过少则不能提供杂交瘤细胞所需要的生长因子，过多会阻碍杂交瘤细胞的贴壁，一般以铺满孔底 30% 为好。

原理

新型乳剂是一种具有自主---、独0特配方的新型油包水佐剂，用于免0疫小鼠和家兔等实验动物以制备单、多克0隆抗0体。该佐剂以弗氏不完全佐剂为基础，添加了多种具有强免0疫---0活性的tlr配体。新型佐剂与常规使用的弗氏佐剂相比，具有以下优点：

（1）新型乳剂活性强于弗氏不完全佐剂；

（2）与弗氏完全佐剂不同，不含有干扰免0疫应答的无关蛋白成分；

（3）安全性好，副反应率低；

（4）免0疫针次少、抗原用量低等多方面优点。