通用步骤

加血0清封闭液

1. 去掉片子上多余缓冲液。

2. 取适量血0清封闭液完全覆盖切片。

3. 在湿盒中室温孵育 15min。

4. 浸入洗涤缓冲液中 5min。

加一抗

1. 去掉切片上的多余洗涤缓冲液。

2. 将稀释的一抗加到切片上，完全覆盖组织细胞。

3. 在湿盒中室温孵育 30min。

4. 用洗涤缓冲液洗去一抗，在洗液中润洗 5min。

注：如果显色速度过快，建议进一步稀释一抗，将一抗稀释度以 1/50、1/100、1/200、1/400 和 1/800，zui佳稀释度的选择是显色 10min 后阳性显色效果满意而没有背景显色。

加生物素化抗0体

1. 去掉缓冲液，擦掉切片周围的液体。

2. 加生物素化抗0体，完全覆盖切片。

3. 室温孵育 30min。

4. 用洗涤液洗去抗0体，用洗涤液润洗 5min。

加亲合素-hrp

2. 加亲合素-hrp，完全覆盖切片。

4. 用洗涤缓冲液洗去亲合素-hrp，用洗涤缓冲液润洗 5min。

显色

1. 加显色液（自备）显色。

可能出现的问题和解决方法

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抗0体稀释液，即用于稀释抗0体的溶液。在抗原抗0体反应的实验中，需用已经制备的抗0体检测样本中的抗原，但抗0体试剂的浓度---，需要稀释合适的倍数后才可以用于检测抗原。

脱脂奶粉

脱脂奶粉容易发霉变质，不利于抗0体的回收和保存；国产milk脱脂不充分会增加背景、拮抗抗原抗0体结合，且不能用来做磷酸化蛋白；不能用于稀释二抗。