发布单位:苏州博特龙免疫技术有限公司 发布时间:2022-8-24
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博奥龙公司主要产品有抗0体制0备全套产品、---包装相关产品、2万多种科研用抗原抗0体、1200多种二抗,涵盖20多个物种和hrp、biotin、fitc、au、pe、dylight、alexa fluor、cy3、cy5、 amca、tritc、texa red等标记二抗;品类齐全的内参标签抗0体;另有wb、ihc、elisa、细胞培养相关试剂及诸多特色产品和特色技术服务。
western blot-抗0体检测技术服务?
一、服务内容
1、从动物细胞、人或动物组织、---、植物等样品中提取蛋白,重组蛋白、血0清、培养上清等样品
2、对样品中蛋白进行半定量分析
3、western blot检测
(1) 电泳:聚丙0烯---凝胶(sds-page)分离蛋白样品
(2) 湿法转印(bloting:tank transfer)
(3) 杂交:用抗0体鉴定膜上的特定蛋白(incubation: antibody)
(4) 化学发光检测(ecl),胶片---,totallab quant软件读取iod值(可选)
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抗0体亚型鉴定原理:
抗0体亚型鉴定的原理是利用双抗0体夹心法鉴定小鼠淋巴细胞杂交瘤培养上清中单克0隆抗0体或特异亲和纯化的单克0隆抗0体的类和亚类(可区分出 igg1﹨igg2a﹨igg2b﹨igg3﹨igm﹨iga)。采用小鼠抗0体共有位点的二抗包被微孔板,与加入的培养上清中的小鼠抗0体结合,再加入hrp 标记的抗小鼠各类、亚类的抗0体来分别反应,zui后用 tmb 底物系统显色并用稀---终止,再通过酶0标仪检测吸光度来判断被测单克0隆抗0体的类或亚类。
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1、一次没用完的板子要带干燥剂放自封袋封好,随盒存放。
2、拿放板子时不要剧烈抖动,以免孔间交叉污染出现错误结果。
3、本试剂一般不会出现两个阳性,但出现两个阳性的现象不论在进口或国产试剂中都是真实存在的,一般会一个 od ---,另一个很低但却还能判为阳性,实验分析表明这种情况下以 od 高值孔为准,出现这种情况有多重原因:
(1)培养的细胞中有饲养细胞残留,
(2)抗0体本身存在变异,
(3)样品为非特异亲和纯化的抗0体或样品是腹0水,
(4)上清出现少量污染,
(5)实验操作粗放,
(6)加错试剂。
4、通用阳性对照数据并不一定完全一样,仅作为试剂有效指示。
血0清的分离
如果用三角瓶或平皿盛血,将器皿倾斜放置于37oc烘箱2hr,转移到4oc沉淀过夜,第二天早上用吸管吸取血0清。如果用离心管收集,37oc烘箱放置2hr,转移到4oc沉淀过夜,第二天早上离心,10000rcf,10分钟。在血0清中加入nan3 至终浓度0.02%,分装后-20oc保存。
小结:抗血0清获得之前要件的抗0体的效价、抗0体的特---以及抗0体的亲和力;获得抗血0清之后,要分装保存抗血0清,一般情况下,-20度可保存数月至数年抗0体的效价都不会发生变化。抗0体的效价可以通过琼脂扩散试验和酶联免0疫吸附试验进行鉴定。