材料与方法

一、材料

afp购自上海领潮公司。sp2／0骨0髓瘤细胞(中科院上海细胞库)。8～12周龄balb／c小鼠(第四军0医大学实验动物中心)。spf级。

二、方法

1．动物免0疫：将4只8～12周龄balb／c小鼠随机分为两组，每组2只，分别命名为1号和2号(第yi组)、3号和4号(第二组)。第yi组按常规免0疫方法进行免0疫一…，第二组采用改良的免0疫方法进行免0疫。免0疫前静脉采集少量---，析出血0清作为后续检测的阴性对照血0清。

第yi组：afp50ug(50肚1)与等量福氏完全佐剂(sigma，美国)混合，充分乳化后注入8～12周龄balb／c小鼠腹腔，2周后用同量抗原加不完全福氏佐剂(sigma，美国)腹腔注射，4周后用同量抗原加不完全福氏佐剂腹腔注射，融合前3 d作腹腔注射加强免0疫。

抗果蝇 mrj 蛋白单克0隆抗0体的制备和鉴定

摘要: 制备抗 果 蝇 mrj 蛋白单克0隆抗0体可用于研究果蝇 mrj 的 生 物 学 功 能，使 用 iptg 诱 导 重 组 质 粒pet28a-mrj 在大肠杆0菌 rosetta 中表达，重组蛋白经过 ni-ida 凝胶柱亲和纯化后免0疫 balb/c 小鼠。然后取免0疫好的小鼠的脾0脏细胞与小鼠骨0髓瘤细胞 sp2 /0 融合，经克0隆和筛选获得了能分泌抗果蝇 mrj 蛋白单克0隆抗0体的杂交瘤细胞株。腹0水制备后获得单克0隆抗0体，通过 elisa 和 western blot 对所获得的抗0体进行鉴定，结果表明所制备单克0隆抗0体能够特---结合于原核及真核细胞表达的 mrj 蛋白，可用于研究 mrj 基因的生物学功能。

关键词: mrj; 细胞融合; 单克0隆抗0体

试剂与仪器

试 剂: pet28a-mrj 转 rosetta 菌 0种 由 本 实 验 室 所保存。免0疫佐剂 quickantibody 购自北京康碧泉公司;hat 选择性培养基、ht 培养基、8-azaguanine 和融合试剂 50% peg 购自美国 sigma 公司; 胎牛血0清及 prmi 1640 培 养 基 为 hyclone 产 品; 辣 根 过 氧 化 物 酶( hrp) 标记山羊抗小鼠 igg ; 8 周龄雌性健康 balb / c 小鼠，本实验室饲养; 小鼠骨0髓瘤细胞 sp2 /0 由---学赠送，融合前两星期复苏并经 8-azaguanine筛选; 其他试剂均为国产分析分析纯。

仪器: 二 氧 化 碳 培 养 箱( thermo) ; 倒 置 显 微 镜( olympus) ; 细胞培养耗材，96 孔板、24 孔板、6 孔细胞培养板、移液---( corning) ; 1 ml 的 a 蛋白层析柱

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博奥龙公司主要产品有抗0体制备全套产品、---包装相关产品、2万多种科研用抗原抗0体、1200多种二抗，涵盖20多个物种和hrp、biotin、fitc、au、pe、dylight、alexa fluor、cy3、cy5、 amca、tritc、texa red等标记二抗；品类齐全的内参标签抗0体；另有wb、ihc、elisa、细胞培养相关试剂及诸多特色产品和特色技术服务。

通过皮下或肌肉单点注射免0疫动物，小鼠每针次100μl，家兔每针次200μl。

（1）佐剂与抗原混合后应尽快注射，若放置时间较长出现水油相分层，则必须按上述步骤2重新振荡混匀；

（2）抽入针管前应摇匀，抽入针管后应尽快注射；

（3）尽量选择---淋巴0结附近（如腋窝和腹0股0沟附近）的皮下或肌肉进行免0疫。