复苏细胞：

1.   将细胞冻存管由液态氮中取出，置于37度水浴快速溶解回温。此时可准备培养基、无菌15ml离心管、培养瓶。

2.   于生物安全柜内，直接以少量培养基反复冲融，使细胞团块化冻。

3.   先在无菌15ml离心管中加入5ml培养基，再将化冻的细胞悬液加入离心管中。以200~300g，3分钟离心收集细胞。

4.   倒去上清液，以新鲜培养基重悬细胞，移到培养瓶中培养。

5.   隔天更换新鲜培养基，并观察细胞存活状况。

产品特性

l 无动物源成分，无各类---、霉菌和支原体等污染的可能性

l 热源水平低于药典标准1/10，减少外源内毒0素干扰

l 无血0清成分，所有成分均为原0料药级别，---降低批次间差异

l 冻存细胞复苏率---90%

l 即用型产品，无需程序降温,冻存于-80℃冰箱或液氮中长期保存

操作方法

选择对数生长期的细胞冻存，有助于提高细胞复苏存活率。

1.1按照常用方法悬浮细胞或贴壁细胞收集于离心管中。

1.2 1000rpm-1500rpm，5min离心，弃上清液。

1.3加入适量的serum-free细胞冻存液于离心管中，细胞冻存浓度为 1×106 - 1×107 cells/ml。缓慢混合均匀，制成细胞悬液。

1.4将离心管中的细胞混合液分装于已标示完全的冷冻保存管中。

1.5直接将冻存细胞放入-80℃冰箱，24h后转入移至-196℃液氮罐长期冷冻保存。

冻存细胞复苏步骤

1. 从冰箱中取出冻存的细胞，立即放入37℃水浴槽中快速解冻。

2. 待冻存管中细胞混合液完全融化后，将其中的混合液移至离心管中，1000rmp，5分钟离心收集冻存细胞沉淀，移去上清液（操作时 小心，切勿将细胞沉淀移去）。

3. 加入适量的新鲜细胞培养基，使用移液管缓缓加入到细胞沉淀，轻柔地混匀，将细胞混合液移至事先准备好的培养容器中。

4. 镜检细胞后，可根据各自研究的需要和方法经行细胞常规培养。

[1]  tao s c, yuan t, zhang y l, et al. exosomes derived from mir-140-5p-overexpressing human synovial mesenchymal stem cells enhance cartilage tissue regeneration&prevent osteoarthritis of the knee in a rat model[j]. theranostics, 2017, 7(1): 180.

产品特色

?  即用型细胞冻存液

?  直接冻存于-80℃冰箱，长期保存（>;5年），不需要程序性降温

?  高安全性0，---、病菌和支原体等污染可能性低

?  细胞存活率和活力高，批次性差异小

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1. 按每管1ml分装到细胞冻存管中。

2. 直接放入-70℃冰箱中冻存。

备注：无需程序降温盒或从4℃到-20℃到-70℃冰箱的繁琐程序降温。

3.24小时后转入液氮中冻存。

备注：对于不同细胞，使用本细胞冻存液也可在-70℃冰箱中保存数周甚至数月，但建议zui好尽快转入

液氮中保存。

4.复苏方法同常规细胞冻存液。

备注：对于大多数对dmso不敏感的细胞，复苏时甚至传代前无需去除细胞冻存液，实际上本细胞冻存

液中某些成分具有一定的促细胞生长特性。